簡要描述:H22細(xì)胞小鼠肝癌細(xì)胞傳代方法細(xì)胞名稱:小鼠肝癌細(xì)胞細(xì)胞別稱:H22; Hepatoma-22; Hepatoma 22細(xì)胞貨號:SNL-157細(xì)胞種屬:小鼠生長情況:貼壁
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品牌 | 其他品牌 | CAS | 詳見說明書 |
---|---|---|---|
分子式 | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
分子量 | 詳見說明書 | 貨號 | SNL-157 |
規(guī)格 | T25瓶 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 實(shí)驗(yàn) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),能源 |
H22細(xì)胞小鼠肝癌細(xì)胞傳代方法
H22細(xì)胞小鼠肝癌細(xì)胞傳代方法
---尚恩生物 186278592O3---
細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期:2-3天
培養(yǎng)基體積:T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml
傳代比例:1:2-1:4(具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定)
傳代方法:
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基;
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細(xì)胞10-20s,吸走潤洗的PBS;
3.T25瓶加1ml左右胰M,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰M鋪勻瓶底細(xì)胞層;
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化;
5.消化到細(xì)胞間隙變大,但未*脫落時(shí)加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰M消化;
6.混勻細(xì)胞,900rpm離心3-5min,棄上清;
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里;
8.補(bǔ)足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);
注意事項(xiàng) 不同品牌胰M消化時(shí)間差別較大,注意嚴(yán)格控制消化時(shí)間
消化傳代細(xì)胞時(shí)吹打細(xì)胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
細(xì)胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手建議)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手建議);
凍存規(guī)格:200-300萬/ml,1ml每管
凍存方法:
1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞;
2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管;
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室,加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項(xiàng) 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,若有異常,及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案
收貨處理方式(T25瓶/凍存管)
【T25】
①快遞保存溫度:室溫
②初步平衡:T25瓶表面消毒后,放37度培養(yǎng)箱平衡復(fù)溫2h以上
③處理方式:吸走大部分培養(yǎng)基,留10-12ml培養(yǎng)基,拍照并觀察細(xì)胞。密度80%以上即可吸走培養(yǎng)基消化傳代,若密度低于80%可以留10-12 ml繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞密度80%以上
④接種方式:T25傳代第①次建議1:2傳代,即瓶T25傳成兩瓶
⑤注意事項(xiàng):若細(xì)胞出現(xiàn)漂浮,T25瓶不開封,放至37度培養(yǎng)箱過夜,若細(xì)胞貼壁即說明活性正常,按正常操作消化傳代即可;若未貼壁,收集細(xì)胞培養(yǎng)基離心后,將細(xì)胞重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中,同時(shí)原瓶還貼壁的細(xì)胞加培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)
發(fā)貨T25瓶裝滿大約有75ml培養(yǎng)基,可以收集起來,1500rpm離心5min后,取上清4度保存,用于培養(yǎng)細(xì)胞,以平穩(wěn)過渡到客戶自己的培養(yǎng)基
【凍存管】
①快遞保存溫度:液氮長期保存或-80度3天以內(nèi)
②初步平衡:無須平衡,直接放入-80冰箱或者液氮罐保存
③處理方式:37度水浴搖晃盡快融化細(xì)胞,直接在凍存管內(nèi)將細(xì)胞離心。離心轉(zhuǎn)速以離心力150g(約900rpm)左右,1min為宜,棄上清,沉淀用新鮮培養(yǎng)基重懸后接種到10cm培養(yǎng)皿,顯微鏡下觀察細(xì)胞并拍照,24h后換液一次
④接種方式:一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶
⑤注意事項(xiàng):收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完,檢查凍存管是否融化,若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察,若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存,以上情況及時(shí)反饋
干冰發(fā)貨的細(xì)胞只能在-80保存3天左右,長時(shí)間保存會(huì)出現(xiàn)活性下降。干冰發(fā)貨均為兩支,客戶先復(fù)蘇一支,若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶同時(shí)復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳,我方將不提供免費(fèi)售后服務(wù)
特殊情況:
1.若培養(yǎng)瓶或者凍存管出現(xiàn)破碎或漏液情況,及時(shí)拍照聯(lián)系銷售反饋,按指導(dǎo)進(jìn)行進(jìn)一步處理。若只是外包裝破損一般不影響培養(yǎng)瓶和凍存管,請放心使用。
2.若無法觀察到細(xì)胞,建議收集細(xì)胞培養(yǎng)基,1200rpm離心5min,觀察細(xì)胞沉淀量,并用少量培養(yǎng)基重懸沉淀后,取部分懸液放到計(jì)數(shù)板或者載玻片上觀察細(xì)胞。
3.部分細(xì)胞增殖較快,發(fā)貨細(xì)胞量較多時(shí),培養(yǎng)基可能出現(xiàn)顏色變黃現(xiàn)象。繼續(xù)培養(yǎng)使用此類培養(yǎng)基時(shí),需要及時(shí)觀察培養(yǎng)基顏色變化,縮短培養(yǎng)基換液周期,并每瓶多加2-3ml培養(yǎng)基。
4.收貨當(dāng)天不處理細(xì)胞時(shí),T25瓶可以消毒拆封口膜后不擰開瓶蓋放37度培養(yǎng)箱靜置過夜,但不建議超過24h;凍存管可以直接放液氮長期保存或-80度3天以內(nèi),必須一周內(nèi)復(fù)蘇一只培養(yǎng)檢查,否則將超過一周售后期。
更多細(xì)胞有售:
U-118 MG人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤
U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞
U-87 MG人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
SK-OV-3人卵巢癌細(xì)胞
AsPC-1人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞
BxPC-3人原位胰腺腺癌細(xì)胞
PANC-1人胰腺癌細(xì)胞
22RV1人前列腺癌細(xì)胞
PC-3人前列腺癌細(xì)胞
AGS人胃腺癌細(xì)胞
HGC-27人胃癌細(xì)胞(未分化)
KATO III人胃癌細(xì)胞
NCI-N87人胃癌細(xì)胞
SNU-1人胃癌細(xì)胞
HEC-1-A人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞
HEC-1-B人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞
EL4小鼠淋巴瘤細(xì)胞
YAC-1小鼠淋巴瘤細(xì)胞
RAW 264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞
4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞
P19小鼠睪丸畸胎瘤細(xì)胞
B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞
B16-F10小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞
CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞
Hepa1-6小鼠肝癌細(xì)胞
LLC小鼠肺癌細(xì)胞
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Beta-TC-6小鼠胰島素瘤胰島β細(xì)胞
RM-1小鼠前列腺癌細(xì)胞
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PC-12(高分化)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化)
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Colo-320人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
DU145人前列腺癌細(xì)胞
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PK-15豬腎細(xì)胞
A2780人卵巢癌細(xì)胞
CA46人Burkitts淋巴瘤細(xì)胞
等.....
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