在培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的時(shí)候,偶爾會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞接種后貼壁不均勻的情況。有的地方長(zhǎng)得非常密集,有的地方卻太稀疏。雖然這對(duì)于常規(guī)培養(yǎng)并不算大問(wèn)題,但有時(shí)則可能影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
所以一旦遇到貼壁不勻,建議排查原因并優(yōu)化操作方案。
本文中,小尚將細(xì)胞貼壁不均勻總結(jié)歸納為四種情況:
1. 局部生長(zhǎng)密集,密集處呈不規(guī)則分布
l 原因:一般是接種時(shí)沒(méi)有混勻,或者細(xì)胞傳代時(shí)沒(méi)有消化徹di從而形成細(xì)胞團(tuán)塊導(dǎo)致的
l 解決方案:繼續(xù)培養(yǎng)1-2天,待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,重新消化接種,接種時(shí)注意使用十字法或8字法混勻,接種后顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞是否分散為單個(gè)細(xì)胞。
2. 培養(yǎng)器皿中央生長(zhǎng)密集,邊緣稀疏
l 原因:十字法或8字法混勻時(shí)搖晃次數(shù)過(guò)多,液體形成漩渦所導(dǎo)致
l 解決方案:繼續(xù)培養(yǎng)1-2天,待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,重新消化接種。在混勻時(shí)搖晃5-6次即可。
3. 細(xì)胞在培養(yǎng)器皿的半邊生長(zhǎng),形成明顯分界線
l 原因: 這可能是培養(yǎng)箱架子不平造成的
l 解決方案:可通過(guò)調(diào)節(jié)培養(yǎng)箱架子以保持水平解決。
4. 細(xì)胞形成同心圓,并靠邊緣生長(zhǎng)
l 原因:這是由于培養(yǎng)箱風(fēng)扇故障或設(shè)備震動(dòng)導(dǎo)致
l 解決方案:在培養(yǎng)器皿下面墊泡沫板或在架子上放重物可以有所緩解,檢查培養(yǎng)箱風(fēng)扇是否正常運(yùn)轉(zhuǎn)。
總之,細(xì)胞貼壁不均勻可能是多種因素造成的,對(duì)于前兩種情況,一般是傳代操作造成的,重新接種即可解決;而后兩種情況是硬件設(shè)施造成的,則需要調(diào)試設(shè)備。
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