簡要描述:A549細胞人肺腺癌細胞試劑盒細胞名稱:人肺腺癌細胞細胞別稱:A549; A 549; A549; NCI-A549; A549/ATCC; A549 ATCC; A549ATCC; hA549細胞貨號:SNL-089細胞種屬:人生長情況:貼壁
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品牌 | 其他品牌 | CAS | 詳見說明書 |
---|---|---|---|
分子式 | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
分子量 | 詳見說明書 | 貨號 | SNL-089 |
規(guī)格 | T25瓶 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 實驗 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),能源 |
A549細胞人肺腺癌細胞試劑盒
A549細胞人肺腺癌細胞試劑盒
---尚恩生物 186278592O3---
培養(yǎng)環(huán)境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
細胞培養(yǎng)操作
換液周期:2-3天
培養(yǎng)基體積:T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml
傳代比例:1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定)
傳代方法:
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基;
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s,吸走潤洗的PBS;
3.T25瓶加1ml左右胰M,輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰M鋪勻瓶底細胞層;
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化;
5.消化到細胞間隙變大,但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰M消化;
6.混勻細胞,900rpm離心3-5min,棄上清;
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里;
8.補足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);
注意事項 不同品牌胰M消化時間差別較大,注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。
細胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手建議)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手建議);
凍存規(guī)格:200-300萬/ml,1ml每管
凍存方法:
1.消化并離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞;
2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管;
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實驗方案
細胞培養(yǎng)說明
1. 細胞培養(yǎng)需要充足經(jīng)驗,新手或者沒有類似細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人建議在專業(yè)人士指導(dǎo)下進行操作,尤其注意無菌操作、貼壁細胞消化時間及細胞培養(yǎng)密度。
2. 部分細胞在傳代后時,會有以下現(xiàn)象:細胞內(nèi)會有黑色小點、細胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細胞。以上都是細胞培養(yǎng)常見現(xiàn)象,不影響細胞增殖和實驗。
3. 細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡、細胞器折光或者細胞膜表面物質(zhì),這個屬于細胞自身特性,無法清除也無法改變,具體情況可以參考ATCC、DSMZ等大型細胞庫細胞照片。細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片,可以吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗;潤洗不能清除的可以消化細胞重新接種,消化完成后加*培養(yǎng)基終止消化,混勻細胞,收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細胞,再離心后,用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗幾次。
4. 不同品牌胰M溶液成分不一樣,消化活性差別比較大,更換胰M品牌時需重新摸索消化時間,以消化到細胞間隙變大但未漂浮為準,此時結(jié)束消化最佳,避免消化過度導(dǎo)致細胞死亡。細胞消化后比較脆弱,吹打力度不要過大,不要產(chǎn)生過多氣泡,否則會嚴重影響細胞狀態(tài)。
5. 不同細胞生長速度差異較大,所有細胞收貨后第①次傳代建議按1:2傳代。正常培養(yǎng)時生長較慢、密度較低的細胞需要傳代時按1:2傳代,生長較快、密度較高的細胞可以按1:4傳代。
6. 細胞生長偏慢時,可以將血清濃度增加到15-20%培養(yǎng)一段時間,待細胞狀態(tài)和生長速度恢復(fù)正常后換回10%血清
關(guān)于售后:
1.所有細胞免費售后期為一周,一周內(nèi)細胞培養(yǎng)出現(xiàn)異常及時拍照反饋。超出一周沒有任何反饋視為細胞培養(yǎng)正常,后期若出現(xiàn)培養(yǎng)問題不再免費重發(fā)。
2. 申請售后時請?zhí)峁┘毎肇洉r及反饋售后當天細胞清晰照片及培養(yǎng)信息,若無清晰照片及相應(yīng)信息,不予免費售后;若文件較多不方便在線聯(lián)系或傳送,可以向銷售索要細胞情況表,填寫后反饋給銷售。
3. 售后僅針對由于細胞自身狀態(tài)問題導(dǎo)致不可傳代的情況,若客戶收貨一周內(nèi)已經(jīng)傳代或轉(zhuǎn)移細胞多次,出現(xiàn)死亡或者污染時不予免費售后;若客戶在我方未允許的情況下,擅自遺棄細胞,視為客戶自身問題導(dǎo)致細胞異常,不予免費售后。
4. 細胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同,導(dǎo)致細胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異,對于此類細胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為,不予過度解釋或免費售后。
5. 凍存細胞發(fā)貨2管,客戶先復(fù)蘇一支,若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶未反饋并復(fù)蘇2管失敗,我方將不提供免費售后服務(wù)。凍存細胞售后均發(fā)復(fù)蘇培養(yǎng)的,若要重發(fā)凍存細胞,需補加干冰運輸費用。
6. 客戶自行凍存細胞一定要注意凍存后復(fù)蘇一管檢查凍存活性,避免凍存死亡導(dǎo)致絕種。我方不對客戶凍存細胞死亡負責(zé),客戶凍存細胞死亡時不予免費售后。
7. 細胞收貨后,請收集發(fā)貨培養(yǎng)基培養(yǎng)至少一瓶細胞,用于確定細胞培養(yǎng)條件及實驗操作是否合適。
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