-----尚恩生物  I8627859203------

HFL1人胚肺成纖維細(xì)胞HFL1細(xì)胞系

HFL1人胚肺成纖維細(xì)胞HFL1細(xì)胞系

培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、收貨處理方式（T25瓶/凍存管）

【T25】

①快遞保存溫度：室溫

②初步平衡：T25瓶表面消毒后，放37度培養(yǎng)箱平衡復(fù)溫2h以上

③處理方式：吸走大部分培養(yǎng)基，留10-12ml培養(yǎng)基，拍照并觀察細(xì)胞。密度80%以上即可吸走培養(yǎng)基消化傳代，若密度低于80%可以留10-12 ml繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞密度80%以上

④接種方式：T25傳代第①次建議1:2傳代，即瓶T25傳成兩瓶

⑤注意事項(xiàng)：若細(xì)胞出現(xiàn)漂浮，T25瓶不開封，放至37度培養(yǎng)箱過夜，若細(xì)胞貼壁即說明活性正常，按正常操作消化傳代即可；若未貼壁，收集細(xì)胞培養(yǎng)基離心后，將細(xì)胞重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中，同時(shí)原瓶還貼壁的細(xì)胞加培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)
發(fā)貨T25瓶裝滿大約有75ml培養(yǎng)基，可以收集起來，1500rpm離心5min后，取上清4度保存，用于培養(yǎng)細(xì)胞，以平穩(wěn)過渡到客戶自己的培養(yǎng)基

【凍存管】

①快遞保存溫度：液氮長期保存或-80度3天以內(nèi)

②初步平衡：無須平衡，直接放入-80冰箱或者液氮罐保存

③處理方式：37度水浴搖晃盡快融化細(xì)胞，直接在凍存管內(nèi)將細(xì)胞離心。離心轉(zhuǎn)速以離心力150g(約900rpm)左右，1min為宜，棄上清，沉淀用新鮮培養(yǎng)基重懸后接種到10cm培養(yǎng)皿，顯微鏡下觀察細(xì)胞并拍照，24h后換液一次

④接種方式：一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶

⑤注意事項(xiàng)：收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存，以上情況及時(shí)反饋
干冰發(fā)貨的細(xì)胞只能在-80保存3天左右，長時(shí)間保存會(huì)出現(xiàn)活性下降。干冰發(fā)貨均為兩支，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶同時(shí)復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳，我方將不提供免費(fèi)售后服務(wù)

特殊情況：

1.若培養(yǎng)瓶或者凍存管出現(xiàn)破碎或漏液情況，及時(shí)拍照聯(lián)系銷售反饋，按指導(dǎo)進(jìn)行進(jìn)一步處理。若只是外包裝破損一般不影響培養(yǎng)瓶和凍存管，請(qǐng)放心使用。

2.若無法觀察到細(xì)胞，建議收集細(xì)胞培養(yǎng)基，1200rpm離心5min，觀察細(xì)胞沉淀量，并用少量培養(yǎng)基重懸沉淀后，取部分懸液放到計(jì)數(shù)板或者載玻片上觀察細(xì)胞。

3.部分細(xì)胞增殖較快，發(fā)貨細(xì)胞量較多時(shí)，培養(yǎng)基可能出現(xiàn)顏色變黃現(xiàn)象。繼續(xù)培養(yǎng)使用此類培養(yǎng)基時(shí)，需要及時(shí)觀察培養(yǎng)基顏色變化，縮短培養(yǎng)基換液周期，并每瓶多加2-3ml培養(yǎng)基。

4.收貨當(dāng)天不處理細(xì)胞時(shí)，T25瓶可以消毒拆封口膜后不擰開瓶蓋放37度培養(yǎng)箱靜置過夜，但不建議超過24h；凍存管可以直接放液氮長期保存或-80度3天以內(nèi)，必須一周內(nèi)復(fù)蘇一只培養(yǎng)檢查，否則將超過一周售后期。

培養(yǎng)操作說明：

1.細(xì)胞培養(yǎng)需要充足經(jīng)驗(yàn)，新手或者沒有類似細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人建議在專業(yè)人士指導(dǎo)下進(jìn)行操作，尤其注意無菌操作、貼壁細(xì)胞消化時(shí)間及細(xì)胞培養(yǎng)密度。

2. 部分細(xì)胞在傳代后時(shí)，會(huì)有以下現(xiàn)象：細(xì)胞內(nèi)會(huì)有黑色小點(diǎn)、細(xì)胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細(xì)胞。以上都是細(xì)胞培養(yǎng)常見現(xiàn)象，不影響細(xì)胞增殖和實(shí)驗(yàn)。

3. 細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡、細(xì)胞器折光或者細(xì)胞膜表面物質(zhì)，這個(gè)屬于細(xì)胞自身特性，無法清除也無法改變，具體情況可以參考ATCC、DSMZ等大型細(xì)胞庫細(xì)胞照片。細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片，可以吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗；潤洗不能清除的可以消化細(xì)胞重新接種，消化完成后加*培養(yǎng)基終止消化，混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞，再離心后，用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

4. 不同品牌胰m溶液成分不一樣，消化活性差別比較大，更換胰m品牌時(shí)需重新摸索消化時(shí)間，以消化到細(xì)胞間隙變大但未漂浮為準(zhǔn)，此時(shí)結(jié)束消化最佳，避免消化過度導(dǎo)致細(xì)胞死亡。細(xì)胞消化后比較脆弱，吹打力度不要過大，不要產(chǎn)生過多氣泡，否則會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)。

5. 不同細(xì)胞生長速度差異較大，所有細(xì)胞收貨后第①次傳代建議按1:2傳代。正常培養(yǎng)時(shí)生長較慢、密度較低的細(xì)胞需要傳代時(shí)按1:2傳代，生長較快、密度較高的細(xì)胞可以按1:4傳代。

6. 細(xì)胞生長偏慢時(shí)，可以將血清濃度增加到15-20%培養(yǎng)一段時(shí)間，待細(xì)胞狀態(tài)和生長速度恢復(fù)正常后換回10%血清。