簡(jiǎn)要描述:Annexin V-PI染色凋亡試劑盒是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨*PS有高度親和力,可通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的PS與凋亡早期細(xì)胞胞膜結(jié)合,將Annexin V標(biāo)記熒光染料EGFP利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
產(chǎn)品目錄Product center
品牌 | 其他品牌 | CAS | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
---|---|---|---|
分子式 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 純度 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
分子量 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 貨號(hào) | SNK-001 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
染色凋亡試劑盒原理:
磷脂酰絲氨*(PS)在正常細(xì)胞中只存在于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè),而在凋亡早期,PS由細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)外翻至細(xì)胞膜外側(cè)。Annexin V-PI染色凋亡試劑盒是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS特異性結(jié)合。AnnexinⅤ經(jīng)過(guò)FITC、EGFP或PE標(biāo)記后,作為熒光探針,即可通過(guò)PS特異性結(jié)合從而特異性標(biāo)記凋亡早期細(xì)胞。
Propidium iodide(PI)是一種核酸染料,但其不能通過(guò)活細(xì)胞的完整細(xì)胞膜,只能通過(guò)凋亡晚期和死細(xì)胞的細(xì)胞膜,因此只能用來(lái)標(biāo)記凋亡晚期細(xì)胞和死細(xì)胞。
通過(guò)AnnexinⅤ與PI聯(lián)合標(biāo)記,再經(jīng)流式細(xì)胞儀或者熒光顯微鏡檢測(cè),就可以確定細(xì)胞是活細(xì)胞、凋亡早期細(xì)胞還是凋亡晚期細(xì)胞或者死細(xì)胞。
試劑盒組成
A液(Annexin V-EGFP)、B液(PI溶液)、Binding Buffer
染色凋亡試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟:
1. 懸浮細(xì)胞處理:收集細(xì)胞懸液,900rpm 3min離心去除培養(yǎng)基后用PBS潤(rùn)洗2次,再用Binding Buffer將細(xì)胞重懸為1x106個(gè)/ml的細(xì)胞懸液。
貼壁細(xì)胞處理:將細(xì)胞消化下來(lái)吹散后,離心去除胰m及培養(yǎng)基后用PBS潤(rùn)洗2次,再用Binding Buffer將細(xì)胞重懸為1x106個(gè)/ml的細(xì)胞懸液。
2. 取100ul細(xì)胞懸液加入5ul A液與5ul B液,混勻后避光孵育10min。
3. 用熒光顯微鏡或者流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果。
染色凋亡試劑盒注意事項(xiàng):
1. 必須使用活細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),不能使用破壞細(xì)胞膜完整性的試劑處理細(xì)胞。
2. 普遍認(rèn)為PI有潛在致癌風(fēng)險(xiǎn),操作時(shí)注意戴手套操作,避免交叉污染。
3. 孵育結(jié)束后,應(yīng)盡量在1h以內(nèi)檢測(cè)結(jié)果,否則結(jié)果可能出現(xiàn)異常。
4. 細(xì)胞經(jīng)過(guò)消化、離心、清洗后可能會(huì)出現(xiàn)凋亡增多的情況,因此必須注意操作盡量輕柔,離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間盡量低,尤其是貼壁細(xì)胞不要消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞提前進(jìn)入凋亡。
5. AnnexinⅤ是Ca2+依賴性的磷脂結(jié)合蛋白,因此消化細(xì)胞時(shí)盡量不要使用含EDTA的消化液,PBS也不要含EDTA等螯合劑。
6. 使用熒光顯微鏡檢測(cè)時(shí),可以將貼壁細(xì)胞直接接種在玻片上,實(shí)驗(yàn)時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗染色后直接在玻片上觀察細(xì)胞,避免消化損失細(xì)胞導(dǎo)致凋亡率增加。
使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞時(shí),可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置陰性對(duì)照(未染色)、單染對(duì)照(Annexin V-EGFP、PI分別單染)以調(diào)整熒光補(bǔ)償去除光譜重疊,同時(shí)根據(jù)未處理細(xì)胞空白對(duì)照和經(jīng)Annexin V、PI分別細(xì)胞染色后的單染對(duì)照的分析設(shè)定十字門的位置。
熒光顯微鏡下檢測(cè)效果
掃一掃,關(guān)注公眾號(hào)
©2024 武漢尚恩生物技術(shù)有限公司 版權(quán)所有 備案號(hào):鄂ICP備2020018368號(hào)-2 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) Sitemap.xml 總訪問(wèn)量:139639 管理登陸