Raw264.7細(xì)胞是一種常用的小鼠巨噬細(xì)胞系,具有許多研究應(yīng)用。該細(xì)胞系來(lái)源于小鼠ABJ大腸腺瘤,是一種易于培養(yǎng)和大量擴(kuò)增的免疫細(xì)胞系。特點(diǎn)是其具有貪婪力和吞噬作用。這種細(xì)胞可以吞噬細(xì)菌、真菌、病毒、細(xì)胞碎片等多種物質(zhì),且具有抗菌、抗病毒能力。另外,還參與了體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)功能,它可以分泌細(xì)胞因子,如TNF-α、IL-1β、IL-6等,對(duì)免疫細(xì)胞的發(fā)育、分化和免疫反應(yīng)等起重要作用。
Raw264.7細(xì)胞對(duì)一些疾病的發(fā)生和發(fā)展具有重要作用。例如,炎癥和腫瘤都密切相關(guān)。這些細(xì)胞能夠釋放促炎癥因子和細(xì)胞因子,進(jìn)而引起炎癥反應(yīng)。此外,可以通過(guò)其巨噬細(xì)胞的功能抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。使用無(wú)菌實(shí)驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),可以獲得高質(zhì)量的Raw264.7細(xì)胞。鑒于該細(xì)胞系具有多種功能,使用還需要特別注意一些重要的事項(xiàng),例如細(xì)胞傳代數(shù)、細(xì)胞滋養(yǎng)和培養(yǎng)條件的控制,細(xì)胞的維持、質(zhì)量檢測(cè)等。
RAW264.7細(xì)胞廣泛應(yīng)用于炎癥、免疫、腫瘤等領(lǐng)域的研究:
1.免疫應(yīng)答:可以誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)和產(chǎn)生各種細(xì)胞因子,如TNF-α、IL-1β、IL-6等,對(duì)外界病原微生物及其產(chǎn)生的致病物質(zhì)進(jìn)行清除和抵御。
2.紫杉醇治療:紫杉醇是一種抗癌藥物,用于治療多種癌癥,可以通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)來(lái)研究紫杉醇的治療機(jī)制及其影響因素。
3.腫瘤細(xì)胞毒性:對(duì)某些腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒性,可以用于體外篩選和研究抗腫瘤藥物。
4.細(xì)胞凋亡:可以接受不同的刺激,誘導(dǎo)發(fā)生自我凋亡,可以用于模擬某些疾病病理過(guò)程的體外實(shí)驗(yàn)。
RAW264.7細(xì)胞的培養(yǎng)方法:
1.培養(yǎng)基:DMEM高糖培養(yǎng)基。
2.細(xì)胞傳代:當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí),用0.05%胰酶(Trypsin)將細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中脫落,收集細(xì)胞,用培養(yǎng)基洗滌1-2次,細(xì)胞計(jì)數(shù)后平均分配到新的培養(yǎng)器皿中。
3.細(xì)胞的維持和分離:將細(xì)胞在37℃和5%CO2的條件下維持生長(zhǎng),在培養(yǎng)時(shí)要及時(shí)更換培養(yǎng)基。如果需要細(xì)胞的分離,可以使用0.05%胰酶將細(xì)胞離心后,再次懸液。
4.細(xì)胞的處理:將細(xì)胞移至96或24孔培養(yǎng)板并孵育。進(jìn)行藥物處理和細(xì)胞收集。
5.細(xì)胞的凍存:當(dāng)細(xì)胞達(dá)到90%的一天,吸附培養(yǎng)基后,加入5%gl單糖,并快速冷卻至-80℃保存。
6.細(xì)胞的代謝測(cè)定:可以通過(guò)MTT等熒光劑或基因表達(dá)檢測(cè)等方法進(jìn)行細(xì)胞代謝測(cè)定。