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細(xì)胞攻略 | SK-LU-1(人低分化肺腺癌細(xì)胞)細(xì)胞培養(yǎng)教程

更新時(shí)間:2023-02-27瀏覽:625次


 

細(xì)

 

▲SK-LU-1細(xì)胞正常生長(zhǎng)形態(tài)照片



--細(xì) 胞 基 本 信 息---

細(xì)胞名稱:  SK-LU-1(人低分化肺腺癌細(xì)胞)

細(xì)胞別稱:   SK-Lu-1; SK LU 1; SK-Lu1; SK-LU1; SKLU-1; SKLU1; SKLU01

細(xì)胞貨號(hào):   SNL-229

生長(zhǎng)特性:   貼壁

培養(yǎng)條件:   DMEM+10% FBS+1% P/S

培養(yǎng)環(huán)境:  空氣,95%;二氧化碳 (CO2),5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介:  SK-LU-1細(xì)胞來(lái)源于一名64歲患有肺腺癌(III級(jí))的白人女性。SK-LU-1細(xì)胞在免疫耐受大鼠中是致瘤的。SK-LU-1細(xì)胞支原體污染于1971年被發(fā)現(xiàn)并消除,可以用于3D細(xì)胞培養(yǎng)。

 

 

細(xì)




凍存步驟:

1、先將細(xì)胞按傳代步驟消化、離心,至傳代步驟4,棄細(xì)胞上清,獲得細(xì)胞沉淀;

2、加入適量預(yù)先配好的程序性凍存液輕輕重懸細(xì)胞,并將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至做好標(biāo)記的凍存管中;

3、將凍存管放入程序性凍存盒,放入-80℃冰箱過(guò)夜;

4、轉(zhuǎn)移細(xì)胞至液氮保存并登記細(xì)胞保存位置,液氮保存24h后建議復(fù)蘇一管檢測(cè)凍存細(xì)胞的活性,若活性合格即可長(zhǎng)期保存,若低于80%建議重新凍存;

 

 

Tips:

◎1. 檢測(cè)凍存細(xì)胞活性結(jié)果未合格前,培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)細(xì)胞建議繼續(xù)培養(yǎng)直至確認(rèn)凍存合格方可視需要丟棄;

◎2. 程序性凍存液需要配合程序性凍存盒使用,若使用非程序凍存液可以按產(chǎn)品說(shuō)明書處理降溫過(guò)程;

◎3. T25培養(yǎng)瓶長(zhǎng)滿通??梢詢龃?-3管,10cm皿長(zhǎng)滿可以凍存3-4管;

 

 

細(xì) 復(fù)


復(fù)蘇步驟:

1、將所需的培養(yǎng)基放在培養(yǎng)箱預(yù)熱30min后開(kāi)始復(fù)蘇;

2、準(zhǔn)備37度溫水,將細(xì)胞從液氮罐取中出,觀察管內(nèi)無(wú)液氮的情況下,捏住管蓋,將細(xì)胞凍存部分浸入溫水輕輕搖晃,融化至米粒大小冰塊,終止水?。?/span>

3、將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心1-2min,不同離心機(jī)具體轉(zhuǎn)速會(huì)有差異;

4、離心完成后,棄凍存液,用剛才預(yù)熱的培養(yǎng)基緩慢加入凍存管,并輕柔重懸細(xì)胞后接種至T25或者10cm皿中。

 

 

Tips:

◎1. 凍存管在液氮長(zhǎng)期保存過(guò)程中難免滲入液氮,取出細(xì)胞時(shí)震動(dòng)不要過(guò)大,水浴前一定要觀察管內(nèi)是否存在液氮,若有液氮建議靜置一會(huì)待液氮蒸發(fā)后再水??;

◎2. 水浴時(shí)可以使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源,以降低管蓋縫隙滲入水導(dǎo)致污染的概率;

◎3. 水浴至剩米粒大小時(shí)及時(shí)終止水浴,避免過(guò)度水浴或水浴時(shí)間不足;

◎4. 建議水浴完成后直接在離心管內(nèi)離心細(xì)胞,避免再次轉(zhuǎn)移細(xì)胞;

◎5. 復(fù)蘇后的細(xì)胞比較脆弱,吹打和轉(zhuǎn)移細(xì)胞時(shí)盡量輕柔,復(fù)蘇24h后換液去除死亡細(xì)胞;

 

 

 

 

#常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案


一、細(xì)胞密度怎么計(jì)算的?

 

嚴(yán)格意義上,細(xì)胞密度需要收集細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量,但在實(shí)際培養(yǎng)過(guò)程中,并不需要為了精確控制細(xì)胞數(shù)量而消化細(xì)胞計(jì)數(shù)。因此,常用的細(xì)胞密度指細(xì)胞相對(duì)于最大生長(zhǎng)密度的比值,貼壁細(xì)胞可以粗略的用細(xì)胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示,即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部,有細(xì)胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值,當(dāng)然這種表達(dá)方式受限于單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)不同密度時(shí)所占面積不同導(dǎo)致并不嚴(yán)謹(jǐn),但也是相對(duì)直觀、簡(jiǎn)便的表現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)的一種方式;

 

二、培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞碎片較多怎么處理?

1. 細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡及細(xì)胞器折光,這個(gè)屬于細(xì)胞自身特性,無(wú)法清除也無(wú)法改變,大部分細(xì)胞都會(huì)有這種現(xiàn)象,只是不同細(xì)胞顆粒多少有區(qū)別,細(xì)胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營(yíng)養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)顆粒增加,建議使用合適的培養(yǎng)條件。

 

2. 細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片和細(xì)胞代謝產(chǎn)物,可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤(rùn)洗清除,再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤(rùn)洗不能清除的可以換液清洗后等細(xì)胞密度70-80%左右消化處理細(xì)胞,消化完成后加培養(yǎng)基終止消化,混勻細(xì)胞,收集細(xì)胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞,再離心后,用培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時(shí)碎片比較少,傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗幾次。

 

三、細(xì)胞具體消化時(shí)間是多久?

 

每個(gè)客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的,不能規(guī)定消化時(shí)間,以實(shí)際消化效果和客戶經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)

 

 


獻(xiàn)

圖片1.png

Title:        

USP5-Beclin 1 axis overrides p53-dependent senescence and drives Kras-induced tumorigenicity

Journal:   Nature Communications

Date:      2022/12/23

Product name:  SK-LU-1(人低分化肺腺癌細(xì)胞)


產(chǎn)

SNL-492】SK-LU-1(人低分化肺腺癌細(xì)胞)

SNLM-492】SK-LU-1細(xì)胞專用培養(yǎng)基

SNT-001】0.25%胰酶(不含EDTA)



 

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