動物細胞分離培養(yǎng)是用無菌操作的方法將動物體內(nèi)的組織(或器官)取出,模擬動物體內(nèi)的生理條件,在體外進行培養(yǎng),人們借以觀察細胞的生長、增殖和細胞分化以及細胞凋亡或死亡的過程。因為分離的細胞沒有免疫防御系統(tǒng),所以動物細胞分離操作需要比外科手術(shù)更加嚴格的無菌操作,無菌操作的原則就是保證細胞分離過程中的操作環(huán)境,使用的器械、耗材以及試劑無菌。
01
儀器:超凈工作臺、離心機、倒置顯微鏡、培養(yǎng)箱、冰箱、高壓蒸汽消毒裝置、移液器。
02
器械:止血鉗、手術(shù)刀、眼科剪、手術(shù)剪、鑷子、細胞過濾篩等。所有器械清洗完以后,使用棉布包裹,捆好后濕熱滅菌。
03
耗材:培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、離心管(15 mL和50 mL)、巴氏吸管(或玻璃吸管)、移液管、燒杯。如果購買的是無菌包裝的一次性耗材可以直接使用,如果是玻璃材質(zhì)的用品,建議使用高壓蒸汽滅菌。
04
試劑:75%的酒精和碘酒、0.9%的生理鹽水、DBSS、胰蛋白酶、 DMEM(或PRMI-1640液體培養(yǎng)基、抗血凝劑、血清、二甲基亞砜(DMSO)。所使用的液體溶劑大部分使用過濾除菌的方式保證無菌。培養(yǎng)基在使用前先在37℃水浴中升溫。酶儲液放置于-20 ℃,稀釋以后放在4℃中保存,因胰蛋白酶在37℃中降解比較快,所以不建議酶升溫至37℃再使用,可以直接從4℃中取出用完后盡快放回冰箱。因為動物組織比較珍貴,建議試劑在使用前先測試是否染菌。
05
其他:冰塊、脫脂棉球、封口膜、記號筆。
實/驗/室/的/清/潔
【SNB-001】PBS(Phosphate Buffer Saline) 磷酸鹽緩沖液 1x
【SNT-002】0.25%胰酶(含EDTA)
【SNM-002E】DMEM高糖*培養(yǎng)基(含10%血清,雙抗)
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