国产亚洲欧美日韩99综合aⅴ|午夜国产成人精品aaa视频|色婷婷国产成人精品视频|久久精品免视看成人国产

您的位置: 首頁 > 技術(shù)文章 > 293細(xì)胞正確的培養(yǎng)步驟

293細(xì)胞正確的培養(yǎng)步驟

更新時(shí)間:2022-07-26瀏覽:2908次

  293細(xì)胞被用于腺病毒載體的繁殖。利用病毒進(jìn)化目標(biāo)基因并將其轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中是一種有效的方法。然而,由于病毒作為病原體的特性,它們也會(huì)帶來風(fēng)險(xiǎn)。因此,為了繁殖這種病毒載體,需要一種能夠表達(dá)缺失基因的細(xì)胞系。不僅具有生成人糖基化譜和建立調(diào)控記錄的能力,而且具有多種優(yōu)勢(shì),是一種特別有吸引力的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)。
 
  293細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
 
  一、復(fù)蘇細(xì)胞:
 
  將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
 
  二、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
 
  a)對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
 
  1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
 
  2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
 
  3.輕輕吹打細(xì)胞,*脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
 
  4.按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
 
  b)對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
 
  方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
 
  方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

 

聯(lián)系我們
  • QQ:1242926414
  • 郵箱:[email protected]
  • 傳真:86-027-87800889
  • 地址:武漢東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)高新二路388號(hào)武漢光谷國(guó)際生物醫(yī)藥企業(yè)加速器1.2期C22棟二層

掃一掃,關(guān)注公眾號(hào)

©2024 武漢尚恩生物技術(shù)有限公司 版權(quán)所有    備案號(hào):鄂ICP備2020018368號(hào)-2    技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)    Sitemap.xml    總訪問量:139639    管理登陸