国产亚洲欧美日韩99综合aⅴ|午夜国产成人精品aaa视频|色婷婷国产成人精品视频|久久精品免视看成人国产

您的位置: 首頁 > 技術文章 > 【小尚教細胞】傳代細胞的常規(guī)培養(yǎng)

【小尚教細胞】傳代細胞的常規(guī)培養(yǎng)

更新時間:2022-07-15瀏覽:962次

當原代培養(yǎng)成功以后,隨著培養(yǎng)時間的延長和細胞不斷分裂,一方面由于細胞密度過大,細胞與細胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制,生長速度減慢甚至停止將一方面也會因營養(yǎng)物枯竭和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。因此需要將培養(yǎng)細胞進行分離擴大培養(yǎng),細胞由原培養(yǎng)瓶內(nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶的這個過程稱為傳代或者再培養(yǎng)。

圖片



01


傳代標準


傳代時間一般通過兩個方面進行確定:一是在細胞培養(yǎng)過程中,當培養(yǎng)液由于 ph值下降而呈現(xiàn)黃色時,表明細胞已經(jīng)達到最大密度,需要換液或進行傳代培養(yǎng);二是觀察細胞形態(tài),健康細胞形態(tài)飽滿,折光性好,生長致密時即可傳代。初代培養(yǎng)的初次傳代很重要,是建立細胞系的關鍵時期。在初次傳代時一般要特別注意以下3點:


①細胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面之前,不要急于傳代。


②原代培養(yǎng)時細胞多為混雜生長,上皮樣細胞和成纖維樣細胞并存的情況很常見。傳代時不同的細胞有不同的消化時間,因此要根據(jù)需要,注意觀察及時進行處理,并可根據(jù)不同細胞對胰蛋白酶的耐受時間不同而分離和純化所需要的細胞。另外早期傳代的培養(yǎng)細胞較已經(jīng)建系的培養(yǎng)消化時間相對較長。吹打細胞時動作要輕巧,盡可能減少對細胞的損傷。


③初次傳代時細胞接種數(shù)量要多一些,使細胞能盡快適應新環(huán)境有利于細胞生存和增殖。隨消化分離而脫落的組織塊也可一并傳入新的培養(yǎng)瓶。


02


生長周期和傳代比例


體外培養(yǎng)技術中所謂的傳“代"概念并不等于細胞生物學中“親代細胞"與“子代細胞"中“代"的概念。傳代培養(yǎng)的實質就是分離后再次培養(yǎng),進行一次分離再培養(yǎng)稱之為傳一代,傳代數(shù)可以衡量培養(yǎng)物的培養(yǎng)年齡。


傳代是細胞分裂造成的結果,細胞從一次分裂結束到下一次分裂結束為一個細胞周期,分為間期與分裂期兩個階段。細胞周期能準確表示細胞增殖速度。兩次細胞分裂之間的時間也可以用細胞世代時間來表示,所以細胞周期指細胞一個世代所經(jīng)歷的時間。正常細胞培養(yǎng)的世代數(shù)有限,只有癌細胞和發(fā)生轉化的細胞才能無限生長下去。


傳代代數(shù)與細胞的世代數(shù)(增殖代數(shù))并不是同一個概念。在細胞培養(yǎng)時,所說的“第6代細胞"指細胞已經(jīng)傳代6次。以貼壁細胞為例,每傳代一次,大概要倍增3~6次,細胞要經(jīng)歷如下生長過程:游離期、貼壁期、潛伏期、對數(shù)生長期和停止期(平臺期)。當細胞達到平臺期時,就要進行傳代培養(yǎng),否則細胞會中毒,發(fā)生形態(tài)改變,甚至死亡。


培養(yǎng)細胞有密度依賴和接觸抑制的特點,細胞濃度過低,不易存活,表現(xiàn)為細胞在達到增長前有較長的滯留期;細胞濃度過高,發(fā)生接觸抑制后生長遲緩甚至死亡,所以傳代比例通常按1:2~1:4的稀釋度進行。傳代后細胞的接種濃度一般為5x105個/mL。


圖片



推 薦 產(chǎn) 品


【SNS-002】特級胎牛血清

【SNT-002】胰酶(含EDTA)

【SNP-M007】小鼠Kupffer細胞




圖片


公 司 簡 介


漢尚恩生物技術有限公司坐落于武漢東湖區(qū)光谷生物城,專注于細胞及系列產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和服務,公司建有標準化GMP實驗室、動物房,已整體通過ISO 9001:2015質量管理體系認證,獲得企業(yè)、3551人才、瞪羚企業(yè)、科技小巨人等多項榮譽?!?/span> 


公司主要研發(fā)生產(chǎn)細胞系、原代細胞、胎牛血清、基礎培養(yǎng)基、*培養(yǎng)基、輔助試劑等系列產(chǎn)品,提供細胞及培養(yǎng)配套產(chǎn)品一站式采購;細胞庫凍存細胞系500余種,同時通過不間斷引種細胞擴大豐富細胞種類;公司還提供人源細胞系的STR鑒定、大小鼠的種屬鑒定服務等?!?/span>

公司細胞業(yè)務覆蓋國內(nèi)各大高校生物實驗室、生物研究機構及一些生物科研、診斷、制藥公司,不斷為廣大科研工作者提供優(yōu)質的產(chǎn)品和服務!尚恩生物—您專業(yè)的細胞供應商!





1




END



 

聯(lián)系我們
  • QQ:1242926414
  • 郵箱:[email protected]
  • 傳真:86-027-87800889
  • 地址:武漢東湖新技術開發(fā)區(qū)高新二路388號武漢光谷國際生物醫(yī)藥企業(yè)加速器1.2期C22棟二層

掃一掃,關注公眾號

©2024 武漢尚恩生物技術有限公司 版權所有    備案號:鄂ICP備2020018368號-2    技術支持:化工儀器網(wǎng)    Sitemap.xml    總訪問量:139639    管理登陸