1.實驗原理
典型的生長曲線即可分為潛伏期、指數(shù)生長期、平頂期及退化衰老四個部分,其中的三個不同生長時期(潛伏期、指數(shù)生長期和平頂期)是每個細(xì)胞系所共有的特征。通過測定生長曲線,不僅可以了解培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)特性的基本參數(shù)、測定細(xì)胞絕對生長數(shù)、判斷細(xì)胞活力,而且也可用于測定藥物等外來因素對細(xì)胞生長的影響。本實驗采用計數(shù)法測定細(xì)胞生長曲線,通過連續(xù)對細(xì)胞計數(shù)(通常為10天,一般應(yīng)每次計數(shù)3孔細(xì)胞取平均值),然后以存活細(xì)胞數(shù)對培養(yǎng)時間作圖,即得該種細(xì)胞的生長曲線。
2.實驗材料
①小鼠胚胎成纖維細(xì)胞或雞胚成纖維細(xì)胞,DMEM*培養(yǎng)基。
3.操作步驟
① 細(xì)胞接種濃度不能過多也不能過少,在合適的濃度下細(xì)胞在7~10天內(nèi)能長滿而不發(fā)生生長抑制;細(xì)胞數(shù)量太少,細(xì)胞適應(yīng)期太長;數(shù)量太多,細(xì)胞將很快進(jìn)入增值穩(wěn)定期,在一段時間內(nèi)需進(jìn)行傳代,曲線不能準(zhǔn)確反映細(xì)胞生長情況。同種細(xì)胞的生長曲線先后測定要采用同一接種密度,這樣才能做縱向比較;不同的細(xì)胞也要接種細(xì)胞數(shù)相同,才能進(jìn)行比較。
② 細(xì)胞生長曲線是觀察細(xì)胞生長基本規(guī)律的重要方法。只有具備自身穩(wěn)定性生長特性的細(xì)胞才適合在觀察細(xì)胞生長變化的實驗中應(yīng)用。因而在細(xì)胞系細(xì)胞和非建系細(xì)胞生長特性觀察中,生長曲線的測定是最為基本的指標(biāo)。
③ 細(xì)胞生長曲線雖然最為常用,但有時其反映數(shù)值不夠精確,有20% ~ 30%的誤差,需結(jié)合其他指標(biāo)進(jìn)行分析。在生長曲線上細(xì)胞數(shù)量增加1倍時間稱為細(xì)胞倍增時間,可以從曲線上換算出。細(xì)胞倍增的時間區(qū)間即為細(xì)胞對數(shù)生長期,細(xì)胞傳代、冷凍等實驗多應(yīng)在此區(qū)間進(jìn)行。
④ 細(xì)胞在不同培養(yǎng)液中的細(xì)胞生長曲線和細(xì)胞倍增時間可以直接反映細(xì)胞在該種培養(yǎng)液內(nèi)的增殖速度,是對培養(yǎng)液進(jìn)行選擇的主要依據(jù)。通過個同培養(yǎng)液內(nèi)細(xì)胞生長曲線的差異,篩選出對成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞適合的培養(yǎng)液。
⑤通過對細(xì)胞生長曲線的繪制,可比較不同的培養(yǎng)液對細(xì)胞生長曲線變化的影響。在條件允許的情況下,分析培養(yǎng)液中添加不同的生物活性物質(zhì)(如生長因子、激素等)對細(xì)胞生長的影響,從而篩選出合適的細(xì)胞培養(yǎng)液。
產(chǎn) 品 推 薦
【SNL-025】NIH/3T3(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)
【SNL-006】UMNSAH/DF-1(雞胚成纖維細(xì)胞)
【SNS-002】特級胎牛血清
公 司 簡 介
武漢尚恩生物技術(shù)有限公司坐落于武漢東湖區(qū)光谷生物城,專注于細(xì)胞及系列產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和服務(wù),公司建有標(biāo)準(zhǔn)化GMP實驗室、動物房,已整體通過ISO 9001:2015質(zhì)量管理體系認(rèn)證,獲得企業(yè)、3551人才、瞪羚企業(yè)、科技小巨人等多項榮譽(yù)。
公司主要研發(fā)生產(chǎn)細(xì)胞系、原代細(xì)胞、胎牛血清、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、*培養(yǎng)基、輔助試劑等系列產(chǎn)品,提供細(xì)胞及培養(yǎng)配套產(chǎn)品一站式采購;細(xì)胞庫凍存細(xì)胞系500余種,同時通過不間斷引種細(xì)胞擴(kuò)大豐富細(xì)胞種類;公司還提供人源細(xì)胞系的STR鑒定、大小鼠的種屬鑒定服務(wù)等。
公司細(xì)胞業(yè)務(wù)覆蓋國內(nèi)各大高校生物實驗室、生物研究機(jī)構(gòu)及一些生物科研、診斷、制藥公司,不斷為廣大科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù)!尚恩生物—您專業(yè)的細(xì)胞供應(yīng)商!
END
掃一掃,關(guān)注公眾號
©2024 武漢尚恩生物技術(shù)有限公司 版權(quán)所有 備案號:鄂ICP備2020018368號-2 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) Sitemap.xml 總訪問量:139639 管理登陸