細(xì)胞建系的一般程序包括原代培養(yǎng)、第一次傳代、常規(guī)傳代、凍存與復(fù)蘇等過程。所涉及的原代培養(yǎng)、第一次傳代、常規(guī)傳代、凍存與復(fù)蘇等過程的具體方法與常規(guī)的原代培養(yǎng)等技術(shù)一樣。
①取材:材料主要來源于外科手術(shù)或活檢瘤組織,取材時(shí)避免用壞死組織,要挑選瘤細(xì)胞集中和活力較好的部位,瘤性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng),因故不能立即培養(yǎng)者,可凍存。其培養(yǎng)方法及凍存方法同正常組織。
②細(xì)胞的純化:在腫瘤組織中?;祀s有一些成纖維細(xì)胞,培養(yǎng)時(shí)能與瘤細(xì)胞同時(shí)生長,并常壓過癌細(xì)胞,導(dǎo)致細(xì)胞生長受阻甚至消失,應(yīng)仔細(xì)排除。排除方法常有:機(jī)械刮除法、反復(fù)貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。
③提高細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長率:根據(jù)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn),細(xì)胞在體外不易培養(yǎng),建立能傳代的細(xì)胞系更為困難。一般當(dāng)組織或細(xì)胞被原代培養(yǎng)后,要經(jīng)過對新環(huán)境的適應(yīng)才能生長,因此不能局限于一般培養(yǎng)法,須采用一些特殊措施。如:用適宜底物,鼠尾膠原底層及飼細(xì)胞底層等。用細(xì)胞生長因子,根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促細(xì)胞生長因子,如胰島素、氫化可的松,雌激素等。也可以考慮動(dòng)物媒介培養(yǎng)。
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