bv2細(xì)胞是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的一種,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的一道也是主要的一道免疫防線(xiàn)。中風(fēng)引起的腦損傷會(huì)激活小膠質(zhì)細(xì)胞,使小膠質(zhì)細(xì)胞極化為M1型和M2型。M1小膠質(zhì)細(xì)胞可以產(chǎn)生高水平的促炎細(xì)胞因子,加劇急性腦損傷,而M2型表現(xiàn)出對(duì)大腦具有神經(jīng)保護(hù)作用,改善中風(fēng)后的癥狀。然而,M2小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)神經(jīng)保護(hù)的潛在機(jī)制仍不清楚。有文獻(xiàn)表明,間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的外泌體有利于缺血性卒中后神經(jīng)元的重塑和功能恢復(fù),還有小膠質(zhì)細(xì)胞來(lái)源的微囊泡有調(diào)節(jié)神經(jīng)元興奮性的報(bào)道等。
bv2細(xì)胞復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)步驟:
1.從零下80℃冰箱或者液氮罐中取出冷凍管,迅速投入37℃水浴中,使其融化(1分鐘左右)。
2.培養(yǎng)基緩慢稀釋至原體積的10倍以上。
3.1低速離心10分鐘,吸去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基培養(yǎng)剛復(fù)蘇的細(xì)胞。
3.2六個(gè)小時(shí)細(xì)胞*貼壁后吸去含有凍存液的培養(yǎng)基并換成*培養(yǎng)基。
bv2細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)步驟:
1.取密度80%左右的Hela細(xì)胞,吸去舊的培養(yǎng)基,用PBS或者Trypsin消化液潤(rùn)洗細(xì)胞以減少殘留的血清對(duì)Trypsin的抑制作用。
2.吸去PBS或者Trypsin,加入Trypsin消化液,于37℃消化2~4分鐘,于倒置顯微鏡下觀(guān)察,當(dāng)細(xì)胞之間出現(xiàn)間時(shí)或者變圓時(shí),吸掉Trypsin 消化液。(也可以直接加入適量含血清的新鮮培養(yǎng)基終止Trypsin的消化作用并進(jìn)行吹打分離細(xì)胞,消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)靜置以避免漂浮的細(xì)胞滾動(dòng)成團(tuán))
3.加入適量新鮮培養(yǎng)基,用移液器上下吹打數(shù)次打散細(xì)胞團(tuán)塊以盡可能形成單細(xì)胞懸液,吹打均勻后,按照稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)充*培養(yǎng)基并以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。