胎牛血清應(yīng)用在哺乳動物細胞培養(yǎng)中,應(yīng)用很廣泛。比如,能夠用在科研、工業(yè)生產(chǎn)、人獸疫苗生產(chǎn)的質(zhì)量控制及生物技術(shù)藥物的質(zhì)量控制領(lǐng)域。血清是血液凝固后的液體部分,不含血細胞、纖維蛋白及凝集因子等,含有多種對細胞生長需要的營養(yǎng)因子及大分子物質(zhì)。血清白蛋白是血清主要成分。此外,重要的是,胎牛血清中含有大量對細胞生長需要的生長因子,也含有一些小分子物質(zhì),如氨基酸、糖類、脂類及激素類物質(zhì)。
胎牛血清采血:
1、挑選出大約8月齡以上的健康妊娠母牛,經(jīng)剖腹獲取小牛。
2、將小牛清洗干凈后,側(cè)放在萬級潔凈房間內(nèi)的采血臺上,固定四肢及頭部。
3、用來蘇水清洗心臟外部,刮去心臟外部牛毛,露出心臟外部一側(cè)皮膚,用2%碘酒擦拭消毒。
4、在心臟部位切開一道10厘米左右的切口,取出近心血管,先用2%碘酒消毒,再用75%的酒精消毒,用止血鉗夾住血管,切開1厘米左右的切口進行插管,插好管后打開血管的止血鉗,讓牛血順采血管流入另一個潔凈房間內(nèi)的采血瓶中。
5、采血瓶采血前經(jīng)干烤滅菌(180℃2小時)后,按無菌操作注入10毫升左右經(jīng)高壓滅菌的生理鹽水后加塞封口,于采血前半小時放入37℃恒溫箱備用。采血前先晃動瓶內(nèi)生理鹽水,使其充分濕潤瓶壁后倒出,再進行采血并加塞封口。將采血后的采血瓶放37℃恒溫室2小時,再放入4℃冷庫4小時以備離心。
胎牛血清的常規(guī)處理方式是熱鈍化,即放在56°水浴30分鐘;其目的是使血清中的補體成分及一些未知的細胞生長抑制分子失活。熱鈍化處理過程需要小心謹慎,因為血清中的生長因子容易在較高溫度或者較長時間加熱條件下失活,甚至產(chǎn)生沉淀。Gamma照射能夠?qū)μヅQ暹M行滅菌處理。常規(guī)的滅菌方法是多次透過0.1um的濾膜以消除微生物污染,而gamma照射能夠鈍化牛群中常見的病毒。但是,一些類型的病毒能夠抵抗gamma照射,比如細小病毒。