染色凋亡試劑盒貼壁細胞:
A.取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間,無菌超凈臺內(nèi)吹干或用無菌的PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍,再用細胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi),種入細胞培養(yǎng)過夜,使約為50%-80%滿。
B.刺激細胞發(fā)生凋亡后,吸盡培養(yǎng)液,加入0.5ml固定液,固定10分鐘或更長時間(可4℃過夜)。
C.去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時宜用搖床,或手動晃動。
D.加入0.5ml Hoechst33258染色液,染色5分鐘。也宜用搖床,或手動晃動數(shù)次。
E.去染色液,用PBS或0.9%NaC1洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時宜用搖床,或手動晃動。
F.滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上,蓋上貼有細胞的蓋玻片,讓細胞接觸封片液,盡量避免氣泡。
G.熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發(fā)波長350nm左右,發(fā)射波長460mm左右。
染色凋亡試劑盒懸浮細胞:
A.離心收集細胞樣品于1.5ml離心管內(nèi),加入0.5ml固定液,緩緩懸起細胞,固定10分鐘或更長時間(可4℃過夜)。
B.離心去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘。洗滌期間手動晃動數(shù)次。
C.離心后吸去大部分液體保留約50ul液體,再緩緩懸起細胞,滴加至載玻片上,盡量使細胞分布均勻。
D.稍晾干,使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。
E.均勻滴上0.5ml Hoechst33258染色液,染色5分鐘。用吸水紙從邊緣吸去液體,微晾干。
F.去染色液,用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時宜用搖床,或手動晃動。
G滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上,蓋上一潔凈的蓋玻片,盡量避免氣泡。
H.熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發(fā)波長350nm左右,發(fā)射波長460mm左右。