簡要描述:hFOB1.19(人SV40轉(zhuǎn)染成骨細胞)是在0.6mg/mL新*G418存在下,用溫度敏感的表達載體pUCSVisA58轉(zhuǎn)染自然流產(chǎn)的胎兒四肢組織建立的細胞系。在許可溫度33.5℃下細胞分裂很快,而在限制溫度39.5℃下細胞極少分裂或不分裂。hFOB 1.19細胞具有分化為表達造骨細胞表型的成熟造骨細胞的能力。
品牌 | 其他品牌 | 分子式 | hFOB1.19 |
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貨號 | SNL-217 | 規(guī)格 | T25 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 主要用途 | 科學(xué)研究 |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
一、細胞基本屬性
細胞名稱:hFOB1.19(人SV40轉(zhuǎn)染成骨細胞)
細胞別稱:hFOB1.19; hFOB
細胞貨號:SNL-217
細胞種屬:人
生長情況:貼壁
培養(yǎng)條件:DMEM/F12 +10%FBS+1%雙抗+0.3mg/ml G418
培養(yǎng)環(huán)境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細胞培養(yǎng)操作
換液周期:2-3天
培養(yǎng)基體積:T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml
傳代比例:1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定)
傳代方法:
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基;
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s,吸走潤洗的PBS;
3.T25瓶加1ml左右胰m,輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰m鋪勻瓶底細胞層;
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化;
5.消化到細胞間隙變大,但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰m消化;
6.混勻細胞,900rpm離心3-5min,棄上清;
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里;
8.補足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);
注意事項:不同品牌胰m消化時間差別較大,注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。
三、細胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格:200-300萬/ml,1ml每管
凍存方法:
1.消化并離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞;
2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管;
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項:凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實驗方案
Tips:
1. 細胞是轉(zhuǎn)染永生化的,需要添加G418篩選并在33.5度環(huán)境下培養(yǎng),環(huán)境不適或者未添加篩選抗生素的細胞可能會失去永生特性,無法增殖。
我們推薦使用尚恩生物hFOB1.19(人SV40轉(zhuǎn)染成骨細胞)*培養(yǎng)基(產(chǎn)品貨號:SNLM-217)作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
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