a549細(xì)胞是一種廣泛使用的人肺腺癌細(xì)胞系,來(lái)源于原發(fā)性肺腫瘤。具有高度增殖性,現(xiàn)已被用于各種研究應(yīng)用。在自然界中,這些細(xì)胞是鱗狀的,它們可以通過(guò)肺泡擴(kuò)散傳播一些物質(zhì),如水和電解質(zhì)。如果將A549細(xì)胞體外培養(yǎng),它們會(huì)成長(zhǎng)為單層細(xì)胞,附著或緊貼在培養(yǎng)瓶上。人肺泡上皮細(xì)胞株A549可以固定或懸掛在體外的溶液。這些細(xì)胞的另一個(gè)特點(diǎn)是他們能夠合成卵磷脂,并且含有高度不飽和的脂肪酸,這對(duì)于維持細(xì)胞膜磷脂有重要意義。
a549細(xì)胞傳代:
(1)無(wú)菌操作打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶蓋,倒掉培養(yǎng)液。
(2)向已經(jīng)長(zhǎng)滿(mǎn)得細(xì)胞中加入消化液1m1,輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,使消化液流遍所有得細(xì)胞表面,吸棄或倒掉,輕輕沖洗細(xì)胞表面2~3遍,以盡可能去除原培養(yǎng)液中得牛血清。
(3)加入1ml消化液,在37℃培養(yǎng)箱中孵育5~8min后把培養(yǎng)瓶放置在倒置顯微鏡下觀(guān)察,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞得胞質(zhì)回縮、胞間質(zhì)增大后,立即終止消化、
(4)加入5ml預(yù)熱至37℃得培養(yǎng)液,用玻璃吸管反復(fù)吹打以分散細(xì)胞、吹打過(guò)程按順序進(jìn)行,從培養(yǎng)瓶底部一邊開(kāi)始到另一邊結(jié)束,以確保所有得底部都被吹到、
(5)吸取一半得細(xì)胞懸液,接種到新得25cm2培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)足培養(yǎng)液,并且添加10%~20%得胎牛血清。通常每瓶液體量為5~10ml。
(6)倒置顯微鏡下觀(guān)察,37℃、5%C0。培養(yǎng)。
a549細(xì)胞的維持和培養(yǎng):
(1)準(zhǔn)備一個(gè)盛有37℃溫水的燒杯,從液氮罐中取出存有A549細(xì)胞的凍存管,放于37℃溫水中,用鑷子夾住輕輕搖動(dòng)使其迅速融化。
(2)1000~2000r,3~5min離心。
(3)在無(wú)菌操作臺(tái)中采用75%的乙醇*擦拭凍存管,然后打開(kāi)凍存管,注意動(dòng)作要輕柔。
(4)用1ml槍頭將上清液去除,加入1ml預(yù)熱的細(xì)胞培養(yǎng)液將細(xì)胞吹散開(kāi),轉(zhuǎn)移至25cm2培養(yǎng)瓶中。
(5)補(bǔ)充4ml的RPMI1640培養(yǎng)基,并且添加10%的胎牛血清。
(6)倒置顯微鏡下觀(guān)察,37℃、5%C02培養(yǎng)。
(7)24h后,更換新的培養(yǎng)液。
(8)常規(guī)傳代培養(yǎng)。