小鼠原代細胞中的呼吸道上皮細胞系大多來源于腫瘤組織或成系時與腫瘤細胞融合,其生物學行為與正常呼吸道上皮細胞差異較大。為更準確反映呼吸道疾病條件下該類細胞的生物學效應(yīng),對小鼠呼吸道上皮細胞分離的新技術(shù)和培養(yǎng)方法進行了探索。利用鏈霉蛋白酶消化法分離獲得小鼠呼吸道上皮細胞,利用特殊的*培養(yǎng)基和I型膠原包被的培養(yǎng)皿進行原代培養(yǎng)。
鏡下可觀察到呼吸道上皮細胞的纖毛節(jié)律性的定向擺動,細胞較完整地保留了其原有生理功能。分離技術(shù)和培養(yǎng)方法簡單、穩(wěn)定、有效、可靠,為研究呼吸道疾病的細胞模型創(chuàng)造了條件。同時,此法可為其它實驗動物呼吸道上皮細胞的培養(yǎng)提供借鑒。
小鼠原代細胞形態(tài)觀察:原代組織塊培養(yǎng)一般3d后組織塊周圍有生長暈出現(xiàn),且逐漸向周圍擴展,單層細胞3d后已貼壁生長。結(jié)果:光鏡下可見培養(yǎng)的肝細胞呈三角形、圓形、類圓形或扁平不規(guī)則多角形,排列整齊,細胞界限清晰,胞漿豐富透亮,細胞中有核,有單核、雙核,呈圓形或橢圓形,核仁清晰。細胞緊密相連成單層膜,細胞增殖數(shù)量增多時,整塊上皮膜隨之移動,處于上皮膜邊緣的細胞多與膜相連,很少脫火焰狀或旋渦狀走行,胞質(zhì)向外伸出2-3個長短不同的突起。
小鼠原代細胞是指來源活體組織,經(jīng)特定分離方法制備而成的初始細胞。原代細胞離體時間短且不經(jīng)過永生化過程,其生物學特性未發(fā)生很大變化,仍保持原有的遺傳特征,可更好地反映細胞在體內(nèi)的生長狀態(tài),從而獲得與體內(nèi)生理功能更接近的數(shù)據(jù)。