細胞名稱: OCI-LY3(人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞)
細胞別稱: OCI-LY3; OCI-ly3; OCI-LY-3; Oci-Ly-3; OCI-Ly 3; OCILY-3; OCI-Ly03; OCI Ly3; OCILY3; Ly3; LY3
細胞貨號: SNL-226
生長特性: 懸浮
培養(yǎng)條件: 1640+20% FBS+1% P/S
培養(yǎng)環(huán)境: 空氣,95%; 二氧化碳 (CO2),5%;37℃
細胞簡介: OCI-LY3細胞于1983年從一名復發(fā)時患有B細胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL,彌漫性大B細胞淋巴瘤,DLBCL,4B期)的52歲男性骨髓樣本中建立,是一種激活型的B淋巴細胞。OCI-LY3細胞在文獻中描述為EBV陰性,缺乏典型的t(8;14)易位。OCI-LY3細胞HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、MLV均呈陰性。
細胞正常生長形態(tài)照片
OCI-LY3細胞培養(yǎng)注意事項
l OCI-LY3細胞大部分聚集成葡萄串狀懸浮生長,細胞團較大時需要吹打成小團,防止團塊中間的細胞因營養(yǎng)不足而死亡,小團塊無需處理。除非實驗需要,不建議將細胞吹散成單個細胞。
l OCI-LY3細胞對血清要求高,應該使用優(yōu)質血清進行培養(yǎng),血清比例為20%;
l 隨著培養(yǎng)時間增加,會有部分細胞貼壁伸展的情況,傳代時可以輕輕吹打細胞貼壁面,吹下的細胞可以正常傳代,未吹下的細胞無需收集。
l 該細胞培養(yǎng)過程存在密度依賴的情況,細胞密度建議維持在1E5-5E5/ml之間,密度過低或者過高可能會影響細胞狀態(tài);
OCI-LY3細胞換液方法
l 半換液法:
1. 準備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等;(培養(yǎng)基提前預熱)
2. 將培養(yǎng)瓶靜置5-10min,待細胞沉底;(肉眼觀察細胞沉底情況)
3. 吸頭緊貼液體表面,小心吸出一半的培養(yǎng)基,轉移到離心管;
4. 900-1000rpm 3min離心,離心管里若有細胞,則用新鮮培養(yǎng)基重懸后放回原瓶;
5. 原瓶補充一半的新鮮培養(yǎng)基。
l 離心換液法:
1. 準備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等;(培養(yǎng)基提前預熱)
2. 將所有細胞懸液轉移至離心管中;
3. 900-1000rpm,3min離心;
4. 培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基;
5. 離心完成后棄上清,加適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸細胞沉淀,將細胞懸液接種回培養(yǎng)瓶中,混勻細胞,放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
OCI-LY3細胞傳代方法
l 離心法:
1. 準備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等;(培養(yǎng)基提前預熱)
2. 用移液器吸取培養(yǎng)瓶內細胞懸液轉移至離心管中;
3. 900-1000rpm,3min離心收集細胞;
4. 在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基;(T25推薦10mL,T75推薦20mL)
5. 離心完成后,棄離心管內上清,然后加入適量新鮮培養(yǎng)基,輕輕重懸吹散細胞,將細胞懸液均勻接種至若干個新的培養(yǎng)瓶中,輕輕混勻后將細胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
l 直接分瓶法:
1. 輕輕將細胞吹散成小團并混勻。
2. 用移液器吸取培養(yǎng)瓶內細胞懸液,均分到若干個新培養(yǎng)瓶中,每瓶再補充適量的新鮮培養(yǎng)基,輕輕混勻后將細胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
Tips:
l 注意控制吹打力度盡可能輕柔,吹打次數(shù)不要過多,避免細胞受機械損傷。
l 傳代比例推薦1:2
OCI-LY3細胞凍存方法
1. 準備所需的培養(yǎng)基、PBS、血清、DMSO、離心管以及無菌槍頭等;(試劑需提前預熱)
Tips:若凍存前培養(yǎng)基已經(jīng)變黃,先換液靜置培養(yǎng)4h左右,待細胞活力穩(wěn)定后再進行凍存。
2. 根據(jù)收集到細胞量,配制相應量的凍存液,并準備相應數(shù)量的凍存管,在凍存管上標志細胞名稱,代次,凍存時間等信息。推薦凍存液配方:92%FBS+8%DMSO或92%完*培養(yǎng)基+8%DMSO;凍存密度300萬細胞/mL/管。
Tips:凍存密度過低將導致復蘇后狀態(tài)不佳。
3. 將細胞懸液轉移至離心管中1000rpm,3min離心收集細胞;
4. 離心完成后棄上清,加入相應量的配置好的凍存液輕輕重懸混勻細胞,將細胞懸液分裝至凍存管中。注意吹打力度,不要產(chǎn)生過多氣泡;
Tips:加入凍存液混勻細胞后及時分裝并將細胞降溫凍存,以減少DMSO對細胞的毒性。
5. 將細胞放置程序降溫凍存盒中,再將凍存盒轉移至-80℃冰箱進行降溫凍存。
6. 次日(16h-24h后)復蘇一管檢查凍存效果,確認沒問題后及時將凍存細胞放置液氮中保存,細胞在-80℃冰箱放置時間不要超過3天。
OCI-LY3細胞復蘇方法
1. 提前將水浴鍋預熱至37℃,培養(yǎng)基復溫至室溫或37℃,離心機設置好轉速;
2. 將凍存細胞從液氮或-80℃冰箱中取出,迅速置于37℃水浴,快速搖晃至完*融化,融化時間不超過2min;
Tips:
l 若液氮或冰箱距離細胞房較遠,細胞需要放在干冰或冰盒上運送至細胞房。
l 水浴時使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源,避免污染。
3. 直接將凍存管900-1000rpm 2min離心,同時在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基;
4. 離心完成后棄上清,吸取1mL新鮮培養(yǎng)基(建議血清濃度提高至20%)輕輕重懸細胞,吹散細胞后接種到培養(yǎng)瓶中;
5. 使用十字法或8字法將細胞混勻后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
Tips:整個細胞復蘇過程在盡可能5-10min內完成。
OCI-LY3細胞收貨攻略
1. 拆封包裝盒,確認細胞,說明書等是否齊全,收貨細胞名與所購買細胞是否符合;
2. 觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,有無漏液,培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基是否有肉眼可見的絮狀物或者渾濁等,發(fā)現(xiàn)異常及時拍照聯(lián)系銷售人員;
3. 確認無異常后,將培養(yǎng)瓶表面消毒,然后撕掉封口膜豎立放入培養(yǎng)箱平衡4h左右,讓懸浮細胞沉下培養(yǎng)瓶底部;
4. 平衡過程中可以仔細閱讀細胞說明書,知悉細胞所需培養(yǎng)體系,培養(yǎng)環(huán)境以及培養(yǎng)注意事項等;
5. 平衡完成后豎立取出細胞培養(yǎng)瓶,此時大部分細胞沉在培養(yǎng)瓶底部,小心吸取上清至離心管中,保留10mL左右培養(yǎng)基在培養(yǎng)瓶內,小心操作,盡量不要吸到沉在底部的細胞;
6. 將離心管1200rpm,5min離心收集未沉下培養(yǎng)瓶底部的細胞,上清可以4℃保存,后續(xù)用于培養(yǎng)細胞,以平穩(wěn)過度到自己的培養(yǎng)基。將收集到的細胞接種至原培養(yǎng)瓶;
7. 觀察細胞,根據(jù)細胞狀態(tài),以及團塊數(shù)量、大小決定傳代或繼續(xù)培養(yǎng)。
常見問題及解決方案
培養(yǎng)過程中細胞碎片較多怎么處理?
1. 細胞內的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光,這個屬于細胞自身特性,無法清除也無法改變,大部分細胞都會有這種現(xiàn)象,只是不同細胞顆粒多少有區(qū)別,細胞培養(yǎng)體系不適應、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導致細胞內顆粒增加,建議使用合適的培養(yǎng)條件。
2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物,可通過800rpm,3min低速離心以去除部分碎片。少量碎片不影響細胞生長,不建議頻繁離心。
產(chǎn)品推薦:
【SNL-226】OCI-LY3(人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞)(STR鑒定正確)
【SNLM-226】OCI-LY3細胞專用完*培養(yǎng)基
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