細(xì) 胞 基 本 信 息

▲細(xì)胞正常生長(zhǎng)形態(tài)照片

細(xì)胞名稱(chēng)：THP-1(人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞)

細(xì)胞別稱(chēng)：THP1; THP 1; THPI; THP-1(ATCC); Tohoku Hospital Pediatrics-1

細(xì)胞貨號(hào):  SNL-044

生長(zhǎng)特性:  懸浮

培養(yǎng)條件:  1640+10%FBS+0.05mM β-mercaptoethanol+1% P/S

培養(yǎng)環(huán)境:  空氣，95%；二氧化碳 (CO2)，5%

細(xì)胞簡(jiǎn)介：THP-1細(xì)胞從一名1歲的患有急性單核細(xì)胞性白血病的男孩的外周血中分離建立，細(xì)胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細(xì)胞，細(xì)胞膜和胞漿內(nèi)均沒(méi)有免疫球蛋白，表達(dá)C3R和FcR。THP-1細(xì)胞可受佛波酯、TPA誘導(dǎo)向單核系方向分化。THP-1細(xì)胞可以用于3D細(xì)胞培養(yǎng)、免疫系統(tǒng)紊亂、免疫學(xué)和毒理學(xué)研究，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。

THP-1細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

THP-1細(xì)胞懸浮圓形生長(zhǎng)，偶有小聚團(tuán)，屬于正?，F(xiàn)象，無(wú)需吹散；

 圓形透亮、細(xì)胞膜完整的細(xì)胞是活細(xì)胞，如果無(wú)法判斷，可以取少量細(xì)胞用臺(tái)盼藍(lán)染色后計(jì)數(shù)確定細(xì)胞活率；

少量細(xì)胞附著瓶底屬于正常現(xiàn)象，可將懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新瓶，丟棄貼壁的細(xì)胞；

THP-1喜歡偏酸環(huán)境，培養(yǎng)基呈橘色時(shí)可不用換液，補(bǔ)充適量新鮮培養(yǎng)基維持一天再進(jìn)行換液或傳代操作；

THP-1有密度依賴(lài)性，密度低時(shí)生長(zhǎng)較慢，培養(yǎng)密度維持在30萬(wàn)-100萬(wàn)細(xì)胞/mL之間為宜，超過(guò)80萬(wàn)細(xì)胞/mL即可傳代；

THP-1復(fù)蘇后恢復(fù)較慢，如無(wú)特殊情況，復(fù)蘇后48小時(shí)內(nèi)不對(duì)細(xì)胞進(jìn)行操作；

THP-1生長(zhǎng)需要穩(wěn)定的環(huán)境，不頻繁拿出培養(yǎng)箱，不頻繁離心；

培養(yǎng)時(shí)瓶子豎立放置（瓶蓋朝上），可增加細(xì)胞局部密度，促進(jìn)細(xì)胞增殖。

β-巰基乙醇可以消除活性氧自由基，維持細(xì)胞高密度生長(zhǎng)。若培養(yǎng)基中不添加β-巰基乙醇，長(zhǎng)期培養(yǎng)細(xì)胞可能會(huì)出現(xiàn)大量貼壁，嚴(yán)重聚團(tuán)等情況。

THP-1 細(xì) 胞 換 液 方 法

離心換液法：

1.  準(zhǔn)備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預(yù)熱）

2.  將所有細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中；

3.  900-1000rpm，3min離心；

4.  棄上清，加5mL PBS輕輕重懸細(xì)胞進(jìn)行潤(rùn)洗，再900-1000rpm，3min離心；

Tips：此處PBS潤(rùn)洗是為了去除細(xì)胞碎片，平時(shí)培養(yǎng)若細(xì)胞碎片不多可以忽略此步驟，若碎片偏多，可以重復(fù)潤(rùn)洗2次。

5. 培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；

6. 離心完成后棄上清，加適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞沉淀，將細(xì)胞懸液接種回培養(yǎng)瓶中，混勻細(xì)胞，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

半換液法：

1.  準(zhǔn)備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預(yù)熱）

2.  將培養(yǎng)瓶豎立靜置一段時(shí)間，待細(xì)胞沉底；（肉眼觀察細(xì)胞沉底情況）

3.  小心吸出一半的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移到離心管；

4.  900-1000rpm 3min離心，離心管里若有細(xì)胞，則用新鮮培養(yǎng)基重懸后放回原瓶；

5.  原瓶補(bǔ)充一半的新鮮培養(yǎng)基。

Tips：半換液2-3次后需要進(jìn)行離心換液。

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THP-1 細(xì) 胞 傳 代 方 法

離心法：

1.  取少量細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)確定細(xì)胞密度，密度80萬(wàn)/mL以上傳代，并根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果確定傳代比例；

2.  準(zhǔn)備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預(yù)熱）

3.  用移液器吸取培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中；

4.  900-1000rpm，3min離心收集細(xì)胞；

5.  在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；（T25推薦10mL，T75推薦15mL）

6.  離心完成后，棄離心管內(nèi)上清，然后加入適量新鮮培養(yǎng)基，輕輕重懸吹散細(xì)胞，將細(xì)胞懸液均勻接種至培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻后將細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

Tips：懸浮細(xì)胞通常都偏脆弱，注意控制吹打力度盡可能輕柔和離心轉(zhuǎn)速以及時(shí)間不要過(guò)高，避免細(xì)胞受機(jī)械損傷。

直接分瓶法：

1.  取少量細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)確定細(xì)胞密度，密度80w/mL以上傳代，并根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果確定傳代比例；

2.  輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞均勻分散；

3.  用移液器吸取培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)細(xì)胞懸液，均分到若干個(gè)新培養(yǎng)瓶中，每瓶再補(bǔ)充適量的新鮮培養(yǎng)基，輕輕混勻后將細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

Tips：用直接分瓶法傳代1-2次后需進(jìn)行離心傳代。

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THP-1 細(xì) 胞 凍 存 方 法

1.  取少量細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)確認(rèn)細(xì)胞密度。

Tips：若凍存前培養(yǎng)基已經(jīng)變黃，先換液靜置培養(yǎng)4h左右，待細(xì)胞活力穩(wěn)定后再進(jìn)行凍存。

2.  準(zhǔn)備所需的培養(yǎng)基、PBS、血清、DMSO、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（試劑需提前預(yù)熱）

3.  根據(jù)收集到細(xì)胞量，配制相應(yīng)量的凍存液，并準(zhǔn)備相應(yīng)數(shù)量的凍存管，在凍存管上標(biāo)志細(xì)胞名稱(chēng)，代次，凍存時(shí)間等信息。推薦凍存液配方：90%FBS+10%DMSO；凍存密度200-300萬(wàn)細(xì)胞/mL/管。

Tips：凍存密度過(guò)低將導(dǎo)致復(fù)蘇后狀態(tài)不佳。

4.  將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中1000rpm，3min離心收集細(xì)胞；

5.  離心完成后棄上清，加入相應(yīng)量的配置好的凍存液輕輕重懸混勻細(xì)胞，將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中。注意吹打力度，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡；

Tips：加入凍存液混勻細(xì)胞后及時(shí)分裝并將細(xì)胞降溫凍存，以減少DMSO對(duì)細(xì)胞的毒性。

6.  將細(xì)胞放置程序降溫凍存盒中，再將凍存盒轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱進(jìn)行降溫凍存。

7.  次日復(fù)蘇一管檢查凍存效果，確認(rèn)沒(méi)問(wèn)題后及時(shí)將凍存細(xì)胞放置液氮中保存，細(xì)胞在-80℃冰箱放置時(shí)間不要超過(guò)3天。

THP-1 細(xì) 胞 復(fù) 蘇 方 法

1.  提前將水浴鍋預(yù)熱至37℃，培養(yǎng)基復(fù)溫至室溫或37℃，離心機(jī)設(shè)置好轉(zhuǎn)速；

2.  將凍存細(xì)胞從液氮或-80℃冰箱中取出，迅速置于37℃水浴，快速搖晃至完*融化，融化時(shí)間1min左右；

Tips：若液氮或冰箱距離細(xì)胞房較遠(yuǎn)，細(xì)胞需要放在干冰或冰盒上運(yùn)送至細(xì)胞房。

3.  直接將凍存管900-1000rpm 2min離心，同時(shí)在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；

4.  離心完成后棄上清，吸取1mL新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，吹散細(xì)胞后接種到培養(yǎng)瓶中；

5.  使用十字法或8字法將細(xì)胞混勻后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

Tips：整個(gè)細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程在盡可能5-10min內(nèi)完成。

THP-1 細(xì) 胞 收 貨 攻 略

1. 拆封包裝盒，確認(rèn)細(xì)胞，說(shuō)明書(shū)等是否齊全，收貨細(xì)胞名與所購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞是否符合；

2. 觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，有無(wú)漏液，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基是否有肉眼可見(jiàn)的絮狀物或者渾濁等，發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)拍照聯(lián)系銷(xiāo)售人員；

3. 確認(rèn)無(wú)異常后，將培養(yǎng)瓶表面消毒，然后撕掉封口膜豎立放入培養(yǎng)箱平衡4h左右，讓?xiě)腋〖?xì)胞沉下培養(yǎng)瓶底部；

4. 平衡過(guò)程中可以仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，知悉細(xì)胞所需培養(yǎng)體系，培養(yǎng)環(huán)境以及培養(yǎng)注意事項(xiàng)等；

5. 平衡完成后豎立取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，此時(shí)大部分細(xì)胞沉在培養(yǎng)瓶底部，小心吸取上清至離心管中，保留10mL左右培養(yǎng)基在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，小心操作，盡量不要吸到沉在底部的細(xì)胞；

6. 將離心管1200rpm，5min離心收集未沉下培養(yǎng)瓶底部的細(xì)胞，上清可以4℃保存，后續(xù)用于培養(yǎng)細(xì)胞，以平穩(wěn)過(guò)度到自己的培養(yǎng)基。將收集到的細(xì)胞接種至原培養(yǎng)瓶；

7. 輕輕混勻細(xì)胞，取100-200ul細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)，根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果調(diào)整細(xì)胞培養(yǎng)密度。然后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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