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293細(xì)胞該如何進(jìn)行復(fù)蘇?

更新時間:2022-10-27瀏覽:865次

  293細(xì)胞的另一生長特性是貼壁所需時間長且貼壁不牢。細(xì)胞冷凍后復(fù)蘇時,都有不同程度的腫脹,若以50ml培養(yǎng)瓶待細(xì)胞長滿瓶底的70%~80%時消化凍存,復(fù)蘇時將其全部接種至2個50ml瓶中時較為合適。剛復(fù)蘇的293貼壁很慢,復(fù)蘇接種后24小時內(nèi),應(yīng)盡量減少觀察細(xì)胞次數(shù)或不作觀察,以免因晃動而影響細(xì)胞貼壁。復(fù)蘇后48小時左右觀察貼壁情況并進(jìn)行更換培養(yǎng)基比較合適,如果用一次性塑料培養(yǎng)瓶可增加細(xì)胞貼壁牢度。換液前宜將培養(yǎng)基預(yù)熱。
 
  293細(xì)胞傳代:倒去廢液,PBS洗一次(輕),用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化,生長良好細(xì)胞,培養(yǎng)瓶中輕搖,使之流遍所有細(xì)胞表面,即將其吸除或棄去消化30s,然后吸去,再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細(xì)胞變圓,就可加DMEM終止消化,反復(fù)吹打至細(xì)胞全成單個懸浮細(xì)胞即可。12小時-24小時90%以上細(xì)胞貼壁。293細(xì)胞傳代時機(jī)為達(dá)80-90%匯合,傳代比例為1:3。
 
  293細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗:
 
  1、用大瓶培養(yǎng)較小瓶要好,可能是更有利于293均勻的分布,利于營養(yǎng)的攝取。
 
  2、培養(yǎng)液要新鮮,每次只配1000ml,分為2-4瓶,不用的培養(yǎng)液,凍存在-20度。
 
  3、要及時傳代,建議是細(xì)胞基本鋪滿培養(yǎng)瓶底部,但是細(xì)胞之間還沒有貼緊,總是多少有空隙的時候好。
 
  4、如果細(xì)胞貼壁不好,可能是消化過久,或是培養(yǎng)瓶不夠干凈,當(dāng)然要除外細(xì)胞污染。
 
  5、如果使用用玻璃培養(yǎng)瓶或皿,可以采用高壓滅菌的0.2%明膠溶液預(yù)處理培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿,方法是將明膠加入培養(yǎng)皿,使之浸泡到底面的各個部分,然后吸出,置超凈臺內(nèi)晾干即可使用。這樣處理后細(xì)胞貼壁效果好且鏡下細(xì)胞立體感強(qiáng)。如果是新的塑料培養(yǎng)瓶就不用處理。

 

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