就一個實驗室而言無論運作的多么好,總會因為革新技術(shù)或拓展方向二影響原來的流程,從而產(chǎn)生各種各樣的問題。有些地方錯誤的操作有可能帶來嚴(yán)重的后果,那么今天主要列舉細胞生長緩慢的兩大原因。
01
培養(yǎng)體系出現(xiàn)問題
01
檢查你所培養(yǎng)的細胞是否存在污染。
(1)如果培養(yǎng)細胞未添加抗生素,細胞污染則是不可避免的。
① 用肉眼和顯微鏡進行檢查。
② 如果細胞被污染則要棄掉。
(2)由于支原體污染不容易覺察到,因此必須定期檢測。
(3)檢測可能污染的途徑和原因。
02
檢查你用于培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同)。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10×儲存液,而現(xiàn)在購買的培養(yǎng)基更換為1×液體,而隨后證明問題就出自于此。
03
如果問題與培養(yǎng)基無關(guān),那么很可能還是細胞的問題。
(1)復(fù)蘇另一支凍存的細胞,并且與正在培養(yǎng)的細胞加以比較。兩種細胞的培養(yǎng)應(yīng)分開,以免在培養(yǎng)之初就產(chǎn)生污染。隨后按(2)~(4)步的方法做排查。
(2)對傳代培養(yǎng)的細胞進行計數(shù),并繪制生長曲線,與以前培養(yǎng)該細胞的資料進行比較,檢查是否有下列改變:
① 傳代時是否接種密度過低。
② 細胞傳代是否過于頻繁。
③ 傳代前細胞平臺期是否過長。
(3)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號,檢查批號和供貨商。
(4)是否細胞分離過程中嚴(yán)重損傷了細胞,應(yīng)檢測:
① 胰蛋白酶(其他消化試劑)消化時間是否過長。
② 消化液的濃度和活性是否過高、過強。
③ 胰蛋白酶消化時,孵箱溫度是否過高。
④ 吹打消化細胞時是否過于用力。
⑤ 細胞是否對 EDTA過于敏感(如果添加了EDTA)。
⑥ 胰蛋白酶稀釋是否有誤。
⑦ 是否使用了一批劣質(zhì)的胰蛋白酶消化液。
02
檢查共用的設(shè)備和試劑
溫度設(shè)定不準(zhǔn)
01
a 自動調(diào)溫器損壞。
b 開關(guān)孵箱門過于頻繁。
c 孵箱門未關(guān)緊。
d 風(fēng)扇損壞造成散熱不均。
孵箱濕度不能維持
02
a 水盤中未加水。
b 孵箱有滲漏。
c 開關(guān)孵箱門過于頻繁。
d 在Petri培養(yǎng)皿中放置一定量的PBS,每日稱重,以檢查蒸發(fā)率。
孵箱的CO2濃度不準(zhǔn)
03
a 開關(guān)孵箱門過于頻繁。
b CO2控制器出現(xiàn)問題。
公 司 簡 介
武漢尚恩生物技術(shù)有限公司坐落于武漢東湖區(qū)光谷生物城,專注于細胞及系列產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和服務(wù),公司建有標(biāo)準(zhǔn)化GMP實驗室、動物房,已整體通過ISO 9001:2015質(zhì)量管理體系認證,獲得企業(yè)、3551人才、瞪羚企業(yè)、科技小巨人等多項榮譽?! ?/span>
公司主要研發(fā)生產(chǎn)細胞系、原代細胞、胎牛血清、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、*培養(yǎng)基、輔助試劑等系列產(chǎn)品,提供細胞及培養(yǎng)配套產(chǎn)品一站式采購;細胞庫凍存細胞系500余種,同時通過不間斷引種細胞擴大豐富細胞種類;公司還提供人源細胞系的STR鑒定、大小鼠的種屬鑒定服務(wù)等?! ?/span>
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