胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)*高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分*少。
1、性狀、外觀 淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物稍粘稠液體。
2、蛋白質(zhì)含量 3.5%~5.0%( w/v)
3、血紅蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v)
4、無(wú)菌檢驗(yàn) 陰性
5、支原體檢驗(yàn) 陰性
6、細(xì)菌內(nèi)毒素 ≤5(EU/ml)
7、牛腹瀉病毒 陰性
8、大腸桿菌噬菌體 陰性
9、支持細(xì)胞增殖(Sp2/0-Ag14) 生長(zhǎng)曲線(接種濃度)*大增殖濃度≥2.5×106 個(gè)/ml細(xì)胞倍增時(shí)間 ≤15h克隆率 ≥85%。
胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。
其次,組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng),而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。
血清保存和使用須注意:血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過(guò)一個(gè)月。解凍血清時(shí) ,應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會(huì)增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
胎牛血清,小牛血清和新生牛血清三種之間的區(qū)別:這三種血清的成份,總體沒有什么明顯差別,只是有一些成分與其生存環(huán)境有關(guān),如上述有人說(shuō)的抗體很等少。此外,因生長(zhǎng)發(fā)育的需要,有些成分在小牛出生后會(huì)發(fā)生一些變化。不過(guò)還沒有搞清楚它與其它的血清之間的差別。有一點(diǎn)可以肯定,胎牛血清中的部分功能蛋白與小牛血清中的含量有差別。
重要的一點(diǎn)是,胎牛本身生活在一個(gè)潔凈環(huán)境當(dāng)中,其血清與外界隔絕,只要生產(chǎn)工藝科學(xué)規(guī)范,其質(zhì)量肯定要比后兩者好。
根據(jù)牛出生時(shí)間和血清采制分離方法分為:
1、胎牛血清:八月齡胎牛心臟穿刺取血;
2、新生牛血清:出生12-24小時(shí)新生牛靜脈采血;又可細(xì)分為:a.**新生牛血清:采血后靜置自然析出的血清;b.標(biāo)準(zhǔn)新生牛血清:c.經(jīng)離心分離的血清;d.普通新生牛血清:融血或微融血的血清;
3.小牛血清:出生三月齡小牛動(dòng)脈采血分離血清;
血清是血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。對(duì)血清的成分和作用的研究雖有很大進(jìn)展,但仍存在一些問題。
胎牛血清是品質(zhì)*高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分少。
一般選用血清種類可以根據(jù)ATCC及實(shí)驗(yàn)需要來(lái)選擇。其實(shí),除了一些比較嬌貴的細(xì)胞,如干細(xì)胞之類的,其余的大部分細(xì)胞培養(yǎng),用國(guó)產(chǎn)的足以!而且MRC品牌血清之類的口碑也頗好,性能也比較穩(wěn)定,所以很多實(shí)驗(yàn)室都在用。