人紅白血病細(xì)胞培養(yǎng)操作:
1.換液周期2-3天;
2.培養(yǎng)基體積T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml;
3.傳代比例1:2-1:4(具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定);
4.傳代方法1.混勻細(xì)胞,收集細(xì)胞培養(yǎng)基,900rpm離心3-5min,棄上清;
5.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里;
6.補(bǔ)足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
注意事項(xiàng):懸浮細(xì)胞會(huì)附著瓶底,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)基或者吹打細(xì)胞面就會(huì)脫落,不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng),更適合吹打細(xì)胞操作,吹打細(xì)胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
人紅白血病細(xì)胞凍存操作:
1.凍存液配方92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
2.凍存規(guī)格200-300萬/ml,1ml每管。
凍存方法:
1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞;
2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管;
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室,加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存。
注意事項(xiàng):凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,若有異常,及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案。