a549細胞正常狀態(tài)下都呈長梭形,從你提供的細胞圖片看,圓形細胞較多,可能是細胞生長過密,相互擠壓所致!還有許多突起,估計是有其他細胞污染,或是培養(yǎng)液使用時間過長,有污染所致,建議更換新鮮培養(yǎng)液,用新瓶傳代,密度不要過高!近來關(guān)于細胞過度傳代的問題也引起了較為普遍的關(guān)注,由于過度傳代造成遺傳性狀的不穩(wěn)定性和一些表型的喪失使得體外生物學(xué)效應(yīng)的偏差也日益增大,因此盡量在購買或者引進細胞株的時候盡量多多凍存低代次的細胞,以獲得接近原始建株細胞的生物學(xué)特性。
a549細胞凍存方式:
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清;
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配);
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存。
A549細胞人肺癌細胞系常見的污染如下:
1、細菌:細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據(jù)感染細菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。
2、霉菌:培養(yǎng)液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質(zhì),37度孵箱培養(yǎng)2-3天,仍清亮,但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì),鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細胞仍可生長,但時間長之后,細胞的活力狀態(tài)變差,
用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi),再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。
3、支原體:黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁,原體感染,國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后,細胞病變不很明顯,只是慢慢死去。
4、黑蛟蟲:可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養(yǎng)液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的。
5、真菌:一般培養(yǎng)液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了。