游離脂肪酸對(duì)非洲綠猴腎細(xì)胞凋亡的影響
更新時(shí)間:2021-09-24瀏覽:831次
非洲綠猴腎細(xì)胞被成功的用來(lái)培養(yǎng)狂犬病疫苗、乙腦疫苗等多種疫苗,在非典期間又為研究冠狀病毒做出貢獻(xiàn),在醫(yī)藥研究種廣泛應(yīng)用。
非洲綠猴腎細(xì)胞探討脂肪酸對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。利用不同種類不同濃度脂肪酸處理體外培養(yǎng)細(xì)胞,利用光鏡觀察細(xì)胞形態(tài),后經(jīng)Hoechst/PI熒光染色和染色體DNA梯度電泳觀察細(xì)胞形態(tài)改變并確定細(xì)胞凋亡;同時(shí)應(yīng)用蛋白免疫印跡反應(yīng)檢測(cè)淘亡相關(guān)Bc1-2、Bax、Fas、P53和Caspase-3蛋白質(zhì)表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
(1)光鏡觀察顯示:細(xì)胞經(jīng)脂肪酸處理后有形態(tài)上的改變,細(xì)胞產(chǎn)生不同程度的破損,這種損壞程度隨脂肪酸濃度遞增而加強(qiáng)。
?。?)Hoechst/Pl染色表明:飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸都可劑量依賴性的引起Vero細(xì)胞凋亡。隨濃度升高,PI著色加深,染色質(zhì)邊集;Hoechst著色漸淡。
?。?)DNA凝膠電泳顯示:經(jīng)脂肪酸處理的細(xì)胞DNA呈明顯的梯度分子條帶,表現(xiàn)為典型的凋亡現(xiàn)象,此現(xiàn)象隨處理濃度加大而加重。
?。?)Western-blot分析結(jié)果表明:脂肪酸處理的細(xì)胞中,Bcl-2、Bax、Fas、Caspase-3蛋白表達(dá)量發(fā)生改變,其中Bax、Fas蛋白表達(dá)量隨濃度增加而顯著上調(diào),同時(shí),Bc1-2蛋白含量有所降低;另外,飽和脂肪酸處理組中P53蛋白表達(dá)并無(wú)太大差異,而不飽和脂肪酸組P53含量以劑量依賴性上升。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,隨著脂肪酸濃度的升高,Vero細(xì)胞的凋亡程度有所增加,有明顯凋亡現(xiàn)象。由于Bcl-2、Bax、Fas、Caspase-3和P53蛋白表達(dá)發(fā)生變化,提示,這些相關(guān)基因在脂肪酸誘導(dǎo)的Vero細(xì)胞凋亡過(guò)程中起到了重要的作用。